——微生物培養(yǎng)基核心成分的專業(yè)解析
蛋白胨(Peptone)是一種由動(dòng)物組織(如牛肉、酪蛋白)或植物蛋白(如大豆)經(jīng)酶解或酸水解制備的氮源物質(zhì),廣泛用于微生物培養(yǎng)基的配制。其核心功能包括:
提供氮源:為微生物生長(zhǎng)提供氨基酸、多肽及小分子肽類。
促進(jìn)生長(zhǎng):含維生素、礦物質(zhì)等微量成分,加速菌體代謝。
增強(qiáng)適應(yīng)性:不同來(lái)源的蛋白胨可優(yōu)化特定菌株的生長(zhǎng)環(huán)境。
類型 | 原料來(lái)源 | 適用場(chǎng)景 | 特點(diǎn) |
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動(dòng)物源蛋白胨 | 牛肉、豬骨 | 細(xì)菌、真菌培養(yǎng)(如大腸桿菌、酵母) | 氨基酸組成豐富,含維生素B族 |
植物源蛋白胨 | 大豆、小麥 | 乳酸菌、植物內(nèi)生菌培養(yǎng) | 低過(guò)敏原性,適合植物共生菌研究 |
酪蛋白胨 | 牛奶酪蛋白 | 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(如質(zhì)粒轉(zhuǎn)化) | 純度高,批次間穩(wěn)定性強(qiáng) |
胰蛋白胨 | 動(dòng)物胰酶水解 | 高要求微生物(如支原體、衣原體) | 富含支鏈氨基酸,促進(jìn)細(xì)胞膜合成 |
指標(biāo) | 標(biāo)準(zhǔn)值 | 檢測(cè)方法 |
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總氮含量 | ≥12.0% | 凱氏定氮法 |
氨基酸含量 | ≥8.0% | 高效液相色譜法(HPLC) |
灰分 | ≤5.0% | 灼燒法 |
pH值(1%水溶液) | 6.5-7.5 | 電位滴定法 |
溶解性 | 全溶,無(wú)沉淀 | 目視觀察 |
培養(yǎng)基配制
按配方比例稱取蛋白胨(如LB培養(yǎng)基:10 g/L蛋白胨),加入蒸餾水?dāng)嚢枞芙狻?/p>
調(diào)節(jié)pH至目標(biāo)值(如7.0±0.2),121℃高壓滅菌20分鐘。
無(wú)菌操作
滅菌后培養(yǎng)基需在超凈臺(tái)內(nèi)分裝,避免二次污染。
固體培養(yǎng)基冷卻至50-55℃時(shí)倒平板,防止冷凝水過(guò)多。
儲(chǔ)存條件
未開封的蛋白胨需密封保存于干燥陰涼處,避免吸潮結(jié)塊。
開封后建議分裝,4℃冷藏保存,有效期6個(gè)月。
微生物發(fā)酵:作為氮源用于抗生素(如青霉素)、氨基酸(如谷氨酸)的生產(chǎn)。
分子生物學(xué):在LB、SOB等培養(yǎng)基中促進(jìn)質(zhì)粒擴(kuò)增和轉(zhuǎn)化效率。
食品微生物檢測(cè):用于沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)。
環(huán)境科學(xué):研究土壤微生物群落對(duì)不同氮源的響應(yīng)。
微生物生長(zhǎng)測(cè)試
在LB培養(yǎng)基中接種大腸桿菌(E. coli),37℃培養(yǎng)12小時(shí)后,菌落直徑應(yīng)≥2 mm。
氨基酸譜分析
使用HPLC檢測(cè),必需氨基酸(如亮氨酸、異亮氨酸)占比≥30%。
無(wú)菌驗(yàn)證
按《中國(guó)藥典》2020版要求,37℃培養(yǎng)7天,無(wú)菌生長(zhǎng)。
原料溯源
動(dòng)物源蛋白胨需確認(rèn)原料無(wú)瘋牛?。˙SE)風(fēng)險(xiǎn),植物源需避免轉(zhuǎn)基因成分。
批次一致性
長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)建議使用同一供應(yīng)商的同一批次產(chǎn)品,減少實(shí)驗(yàn)誤差。
替代方案
對(duì)高成本實(shí)驗(yàn),可嘗試酵母提取物(Yeast Extract)部分替代蛋白胨(比例1:1)。
Q:蛋白胨結(jié)塊是否影響使用?
A:輕微結(jié)塊可微波低火加熱溶解,嚴(yán)重結(jié)塊需更換新批次。
Q:如何降低培養(yǎng)基泡沫?
A:減少蛋白胨用量至8 g/L,或添加0.1%消泡劑(如聚二甲基硅氧烷)。
Q:蛋白胨與水解酪蛋白(Casein Hydrolysate)的區(qū)別?
A:蛋白胨為多肽混合物,水解酪蛋白為更小分子肽,適合不同菌株需求。
推薦品牌:Oxoid、BD Difco、青島海博生物
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):符合USP、EP、CP藥典要求
技術(shù)支持:提供氨基酸譜分析報(bào)告及微生物生長(zhǎng)驗(yàn)證數(shù)據(jù)